فاطمه احمدی؛ محمد مهدی شریفانی؛ امیر موسوی؛ نگین اخلاقی امیری؛ مصطفی خوشحال سرمست؛ خلیل زینلی نژاد
چکیده
پژوهش حاضر به منظور مقایسه روشهای مختلف استخراج RNAکل با کیفیت بالا در پرتقال تامسون ناول می باشد. مرکبات جز یکی از میوه های استراتژیک در ایران محسوب میگردد و یافتن روش مناسب و کمهزینه ...
بیشتر
پژوهش حاضر به منظور مقایسه روشهای مختلف استخراج RNAکل با کیفیت بالا در پرتقال تامسون ناول می باشد. مرکبات جز یکی از میوه های استراتژیک در ایران محسوب میگردد و یافتن روش مناسب و کمهزینه برای کارهای اجرایی و مولکولی حائز اهمیت است. مواد گیاهی مورد استفاده برای استخراج RNA کل از دو قسمت مختلف پوست (شامل فلاودو و آلبدو) و گوشت پرتقال تامسون ناول از ایستگاه تحقیقات باغبانی قائمشهر، مازندران در سال 1398 جمع آوری شدند. میوه ها بعد از نمونه گیری، در نیتروژن مایع به حالت فریز شده قرار گرفتند و تا زمان استفاده در منفی 80 درجه سانتیگراد نگهداری شدند. به منظور تجزیه و تحلیل مولکولی، نمونهها به آزمایشگاه گروه باغبانی گرگان منتقل شدند. و برای مطالعه از سه روش شامل: تریازول، دنازیست غیرستونی و RNX-PlusTM استخراج RNA کل ارزیابی گردید. به منظور نشان دادن کیفیت و کمیت RNA، بر روی ژل آگارز 1% و با استفاده از اسپکتوفتومتر نانودرآپ در طول موج 230، 260 و 280 تعیین گردید. نتایج با استفاده از طرح کاملا تصادفی در سه تکرار و آزمون دانکن در سطح معنیدار 5 درصد و با استفاده از نرم افزار SAS 9.0 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نتایج وجود باندهای ریبوزومی S28 و S18 مجزا و واضح روی ژل الکتروفورز نمایش میدهد و یکپارچگی RNA با باندهای ریبوزومی شارپ بدست آمد. همچنین با استفاده از این روشها نسبت جذب 280/260، بین 94/1- 80/1 بیانگر این است که، نمونهها بدون آلودگی پروتئین در RNA استخراج شده بودند. و در نسبت جذب 230/260، بین 14/2- 0/2 نمونهها بدون آلودگی پلیساکارید و فنل نشان داده شد. در مقایسه با سایر روشها، در روش تریازول اختلاف معنیداری مشاهده شد. این روش به طور موفقیت آمیزی باعث جداسازی RNA از دو بخش میوه پرتقال شد. بهطورکلی نمونههای جذب 9/1 تا 2 بیشترین خلوص RNA استخراجی دارند و متوسط غلظت RNA در روش تریازول به ترتیب در پوست پرتقال 90/379 (نانو گرم بر میکرو لیتر) و گوشت پرتقال 15/352 (نانو گرم بر میکرو لیتر) داشتند. و کمترین غلظت در روش دنازسیت غیرستونی به میزان 10/263 (نانو گرم بر میکرو لیتر) در گوشت میوه محاسبه گردید. روش تریازول یکی از بهترینها برای استخراج RNA کل باکیفیت میباشد. در ارتباط با این روش بیشترین غلظت و خلوص RNA در نمونه های مختلف (پوست و گوشت) پرتقال نشان داد. به طور کلی در نمونه های پوست (فلاودو و آلبدو) غلظت RNA بیشتری بدست آمد.
